Laboratoriediagnostik av nästan alla infektionssjukdomar baseras på detektering av antikroppar i patientens blod, som produceras mot patogenens antigener, med metoderna för serologiska reaktioner. De började med medicinsk verksamhet från slutet av artonhundratalet till början av nittonhundratalet.
Utvecklingen av vetenskapen har hjälpt till att bestämma den antigena strukturen hos mikrober och de kemiska formlerna för deras toxiner. Detta gjorde det möjligt att skapa inte bara terapeutiska, utan också diagnostiska sera. De erhålls genom att administrera försvagade patogener till laboratoriedjur. Efter flera dagars exponering används blodet från kaniner eller möss för att förbereda preparat som används för att identifiera mikrober eller deras toxiner med hjälp av serologiska tester.
Den yttre manifestationen av en sådan reaktion beror på förhållandena för dess inställning och på tillståndet för antigener i patientens blod. Om mikrobiella partiklar är olösliga fälls de ut, lyseras, binder eller immobiliseras i serumet. Om antigenerna är lösliga uppträder fenomenet neutralisering eller utfällning.
Agglutinationsreaktion (RA)
Det serologiska agglutinationstestet är mycket specifikt. Det är lätt att utföra och ganskavisuellt, för att snabbt fastställa närvaron av antigener i patientens blodserum. Den används för att testa Vidal-reaktionen (diagnos av tyfoid- och paratyfusfeber) och Weigl (tyfusfeber).
Det är baserat på en specifik interaktion mellan mänskliga antikroppar (eller agglutininer) och mikrobiella celler (agglutenogener). Efter deras interaktion bildas partiklar som fälls ut. Detta är ett positivt tecken. Levande eller dödade mikrobiella ämnen, svampar, protozoer, blodkroppar och somatiska celler kan användas för att ställa in reaktionen.
Kemiskt är reaktionen uppdelad i två steg:
- Specifik koppling av antikroppar (AT) med antigener (AG).
- Icke-specifik - utfällning av AG-AT-konglomerat, det vill säga bildning av agglutinat.
Indirekt agglutinationsreaktion (IPHA)
Den här reaktionen är känsligare än den föregående. Det används för att diagnostisera sjukdomar orsakade av bakterier, intracellulära parasiter och protozoer. Den är så specifik att även mycket låga koncentrationer av antikroppar kan detekteras.
Renade fårerytrocyter och mänskliga röda blodkroppar förbehandlade med antikroppar eller antigener används för dess produktion (beroende på vad laboratorieteknikern vill hitta). I vissa fall behandlas mänskliga röda blodkroppar med immunglobuliner. Serologiska reaktioner av erytrocyter anses ha skett om de har lagt sig på botten av röret. Om en positiv reaktionsäg när cellerna är arrangerade i form av ett omvänt paraply, som upptar hela botten. En negativ reaktion räknas om erytrocyterna satt sig i en kolumn eller i form av en knapp i mitten av botten.
Nerbördsreaktion (RP)
Serologiska reaktioner av denna typ används för att detektera extremt små partiklar av antigener. Dessa kan till exempel vara proteiner (eller delar därav), föreningar av proteiner med lipider eller kolhydrater, delar av bakterier, deras toxiner.
Sera för reaktionen erhålls genom att artificiellt infektera djur, vanligtvis kaniner. Med denna metod kan du få absolut vilket utfällande serum som helst. Inställningen av serologiska utfällningsreaktioner liknar agglutinationsreaktioner i verkningsmekanism. Antikroppar som finns i serumet kombineras med antigener i en kolloidal lösning och bildar stora proteinmolekyler som deponeras på botten av röret eller på substratet (gelen). Denna metod anses vara mycket specifik och kan upptäcka även försumbara mängder av ett ämne.
Används för att diagnostisera pest, tularemi, mjältbrand, hjärnhinneinflammation och andra sjukdomar. Dessutom är han inblandad i en rättsmedicinsk undersökning.
Gelutfällningsreaktion
Serologiska reaktioner kan utföras inte bara i ett flytande medium, utan även i agargel. Detta kallas den diffusa nederbördsmetoden. Med dess hjälp studeras sammansättningen av komplexa antigena blandningar. Denna metod är baserad på kemotaxi av antigener mot antikroppar och vice versa. I en gel rör de sigmot varandra i olika hastigheter och, mötande, bildar nederbördslinjer. Varje rad är en uppsättning AG-AT.
Exotoxinneutraliseringsreaktion med antitoxin (PH)
Antoxiska serum kan neutralisera verkan av exotoxin som produceras av mikroorganismer. Dessa serologiska reaktioner är baserade på detta. Mikrobiologi använder denna metod för att titrera sera, toxiner och toxoider och bestämma deras terapeutiska aktivitet. Effekten av toxinneutralisering bestäms av konventionella enheter - AE.
Tack vare denna reaktion är det dessutom möjligt att bestämma arten eller typen av exotoxin. Detta används vid diagnos av stelkramp, difteri, botulism. Studien kan utföras både "på glas" och i gel.
Reaktion av lysis (RL)
Immunserum, som kommer in i patientens kropp, har, förutom sin huvudsakliga funktion av passiv immunitet, även lysande egenskaper. Det kan lösa upp mikrobiella medel, cellulära främmande element och virus som kommer in i patientens kropp. Beroende på specificiteten hos antikropparna som ingår i serumet, isoleras bakteriolysiner, cytolysiner, spiroketoliziner, hemolysiner och andra.
Dessa specifika antikroppar kallas "komplement". Det finns i nästan alla mänskliga kroppsvätskor, har en komplex proteinstruktur och är extremt känslig för temperaturstegring, skakningar, syror och direkt solljus. Men i torkat tillstånd kan den behålladess lyserande egenskaper upp till sex månader.
Det finns dessa typer av serologiska reaktioner av denna typ:
- bakteriolys;
- hemolys.
Bakteriolys utförs med hjälp av patientens blodserum och specifikt immunserum med levande mikrober. Om tillräckligt med komplement finns i blodet kommer forskaren att se bakterierna lysera och reaktionen anses vara positiv.
Den andra serologiska reaktionen av blodet är att en suspension av patientens röda blodkroppar behandlas med serum som innehåller hemolysiner, som aktiveras endast i närvaro av en viss komplimang. Om det finns en, observerar laboratorieassistenten upplösningen av röda blodkroppar. Denna reaktion används allmänt inom modern medicin för att bestämma komplementtitern (det vill säga dess minsta mängd som provocerar erytrocytlys) i blodserum och för att utföra en analys för komplementfixering. Det är på detta sätt som ett serologiskt test för syfilis görs - Wasserman-reaktionen
Komplementfixeringsreaktion (CFR)
Denna reaktion används för att detektera antikroppar mot ett smittämne i patientens blodserum, samt för att identifiera patogenen genom dess antigena struktur.
Fram till denna punkt har vi beskrivit enkla serologiska reaktioner. RSK anses vara en komplex reaktion, eftersom inte två, utan tre element interagerar i den: antikropp, antigen och komplement. Dess väsen ligger i det faktum att interaktionen mellan antikroppen och antigenetförekommer endast i närvaro av komplementproteiner, som adsorberas på ytan av det bildade AG-AT-komplexet.
Antigenerna själva, efter komplementtillsats, genomgår betydande förändringar, vilket visar kvaliteten på reaktionen. Det kan vara lys, hemolys, immobilisering, bakteriedödande eller bakteriostatisk verkan.
Reaktionen i sig sker i två faser:
- Bildning av ett antigen-antikroppskomplex som inte är visuellt synligt för granskaren.
- Förändring av antigenet under inverkan av komplement. Denna fas kan oftast spåras med blotta ögat. Om reaktionen inte är synlig, används ett extra indikatorsystem för att identifiera förändringar.
Indikatorsystem
Denna reaktion är baserad på komplementfixering. Renade baggeerytrocyter och komplementfritt hemolytiskt serum tillsätts till provröret en timme efter att RSC har satts in. Om ett obundet komplement finns kvar i provröret, kommer det att ansluta sig till AG-AT-komplexet som bildas mellan fårblodceller och hemolysin och få dem att lösas upp. Detta kommer att innebära att RSK är negativ. Om erytrocyterna förblev intakta är reaktionen därför positiv.
Hemagglutinationstest (RGA)
Det finns två fundament alt olika hemagglutinationsreaktioner. En av dem är serologisk, den används för att bestämma blodgrupper. I det här fallet interagerar röda blodkroppar med antikroppar.
Och den andrareaktionen gäller inte serologisk, eftersom röda blodkroppar reagerar med hemagglutininer som produceras av virus. Eftersom varje patogen endast verkar på specifika erytrocyter (kyckling, lamm, apa) kan denna reaktion anses vara mycket specifik.
Du kan se om en reaktion är positiv eller negativ genom placeringen av blodkropparna i botten av provröret. Om deras mönster liknar ett inverterat paraply, finns det önskade viruset i patientens blod. Och om alla erytrocyter har bildats som en myntkolonn, så finns det inga önskade patogener.
Hemagglutinationsinhibitionstest (HITA)
Detta är en mycket specifik reaktion som låter dig bestämma typen, typen av virus eller förekomsten av specifika antikroppar i patientens blodserum.
Dess essens ligger i det faktum att antikropparna som läggs till provröret med testmaterialet förhindrar avsättning av antigener på erytrocyter, och därmed stoppar hemagglutinationen. Detta är ett kvalitativt tecken på förekomsten i blodet av specifika antigener för det specifika viruset som eftersöks.
Immunofluorescensreaktion (RIF)
Reaktionen är baserad på förmågan att detektera AG-AT-komplex med fluorescerande mikroskopi efter deras behandling med fluorokromfärgämnen. Denna metod är lätt att hantera, kräver inte isolering av renkultur och tar kort tid. Det är oumbärligt för snabb diagnos av infektionssjukdomar.
I praktiken är dessa serologiska reaktioner uppdelade i två typer: direkta och indirekta.
Direct RIF produceras frånantigen, som är förbehandlat med fluorescerande serum. Och den indirekta är att först behandlas läkemedlet med ett konventionellt diagnostikum som innehåller antigener för antikropparna av intresse, och sedan appliceras det självlysande serumet, som är specifikt för proteinerna i AG-AT-komplexet, och mikrobiella celler. bli synlig i mikroskop.
