Undersökningen av bakterier är av stor praktisk betydelse för människor. Hittills har ett stort antal prokaryoter upptäckts, som skiljer sig från varandra i patogenicitet, utbredningsområde, form, storlek, antal flageller och andra parametrar. För att studera denna stam i detalj används en bakteriologisk forskningsmetod.
Vilka är metoderna för att analysera bakterieceller?
För att avgöra om bakterier är patogena undersöks kulturen på olika sätt. Bland dem:
1. Bakterioskopisk metod.
2. Bakteriologisk metod.
3. Biologisk metod.
Bakterioskopiska och bakteriologiska forskningsmetoder bygger direkt på att arbeta med prokaryota celler, då biologisk analys krävs för att studera effekten av sådana celler på den levande organismen hos försöksdjur. Enligt graden av manifestation av vissa tecken på sjukdomen, kan forskaren göraslutsats om närvaron eller frånvaron av patogena bakterier i provet, samt naturligt föröka dem i djurets kropp för att erhålla deras odling och användning i andra arbeten.
Den bakteriologiska metoden för forskning skiljer sig från bakterioskopisk. I den första används en speciellt framställd kultur av levande prokaryoter för analys, medan i den andra arbetar man med döda eller levande celler på en glasskiva.
Stadier av den bakteriologiska forskningsmetoden. Mikrobiologi
Principen att studera egenskaperna hos en bakteriekultur kan vara användbar både för mikrobiologer som har satt som mål att studera prokaryota celler, och för laboratorietekniker vars uppgift är att fastställa bakteriers patogenicitet eller icke-patogenicitet, och diagnostisera sedan patienten.
Metoden för att studera bakterier är uppdelad i tre steg:
1. Isolering av bakterier från originalprovet.
2. Sår bakterier och odlar en ren kultur, studerar dess egenskaper.
3. Detaljerad studie av bakterieceller.
Första etappen
Provet, eller utstryk, tas från mediets fria yta eller från patienten. Därmed får vi en "cocktail" av många typer av bakterier som måste sås på ett näringsmedium. Ibland blir det möjligt att omedelbart isolera de nödvändiga bakterierna, med kännedom om deras distributionspunkter i kroppen.
Efter två eller tre dagar väljs de önskade kolonierna ochsås på fast medium av petriskålar med hjälp av en steril slinga. Många laboratorier arbetar med provrör, som kan innehålla fasta eller flytande näringsmedia. Så går den bakteriologiska metoden för forskning inom mikrobiologi till.
Andra etappen
Efter att ha erhållit enskilda kolonier av bakterier utförs en direkt makro- och mikroanalys. Alla parametrar för kolonierna mäts, färgen och formen för var och en av dem bestäms. Det är inte ovanligt att man räknar kolonier på en petriskål och sedan i utgångsmaterialet. Detta är viktigt vid analys av patogena bakterier, vars antal beror på graden av sjukdomen.
Bakteriologisk forskningsmetod, vars andra steg är att studera enskilda kolonier av mikroorganismer, kan associeras med en biologisk metod för att analysera bakterier. Ett annat mål med att arbeta i detta skede är att öka mängden källmaterial. Detta kan göras på ett näringsmedium, eller så kan du utföra ett experiment in vivo på levande experimentella organismer. Patogena bakterier kommer att föröka sig, och som ett resultat kommer blodet att innehålla miljontals prokaryota celler. Det är lätt att förbereda det nödvändiga arbetsmaterialet av bakterier från det tagna blodet.
Tredje etappen
Den viktigaste delen av studien är bestämningen av bakteriekulturens morfologiska, biokemiska, toxigena och antigena egenskaper. Arbete utförs med förrensade kulturer på ett näringsmedium, samt med preparat (ofta färgade) i mikroskop.
Ange ägarskappatogena eller opportunistiska bakterier till en eller annan systematisk grupp, såväl som att bestämma deras resistens mot läkemedel, tillåter den bakteriologiska metoden för forskning. Steg 3 - antibiotika, d.v.s. analys av bakteriecellers beteende under förhållandena för innehållet av läkemedel i miljön.
Undersökningen av antibiotikaresistens i en kultur är av stor praktisk betydelse när det är nödvändigt att förskriva nödvändiga, och viktigast av allt, effektiva läkemedel för en viss patient. Det är här den bakteriologiska forskningsmetoden kan hjälpa.
Vad är ett tillväxtmedium?
För utveckling och reproduktion måste bakterier finnas i förberedda näringsmedier. Till följd av konsistens kan de vara flytande eller fasta, och efter ursprung - vegetabiliskt eller animaliskt.
Grundläggande mediekrav:
1. Sterilitet.
2. Maximal transparens.
3. Optimala indikatorer på surhet, osmotiskt tryck, vattenaktivitet och andra biologiska värden.
Erhålla isolerade kolonier
1. Drygalsky-metoden. Det består i det faktum att ett utstryk med olika typer av mikroorganismer appliceras på bakterieslingan. Denna slinga förs längs den första petriskålen med ett näringsmedium. Vidare, utan att ändra slingan, utförs metoden för restmaterial på den andra och tredje petriskålen. Så på de sista proverna av kolonin kommer bakterierna inte att sås för tätt, vilket förenklar möjligheten att hitta de nödvändiga för arbete.bakterier.
2. Koch metod. Den använder provrör med smält näringsmedium. En slinga eller pipett med ett utstryk av bakterier placeras där, varefter innehållet i provröret hälls på en speciell platta. Agar (eller gelatin) stelnar efter en tid, och det är lätt att hitta de önskade cellkolonierna i sin tjocklek. Det är viktigt att späda blandningen av bakterier i provrör innan arbetet påbörjas så att koncentrationen av mikroorganismer inte blir för hög.
Den bakteriologiska forskningsmetoden, vars stadier är baserade på isolering av den önskade bakteriekulturen, kan inte klara sig utan dessa två metoder för att hitta isolerade kolonier.
Antibiogram
Visuellt kan bakteriers reaktion på läkemedel ses på två praktiska sätt:
1. Pappersskivametod.
2. Förädla bakterier och antibiotika i flytande medium.
Papperskivormetoden kräver en odling av mikroorganismer som har odlats på ett fast näringsmedium. På ett sådant medium lägg några bitar av rundat papper indränkt i antibiotika. Om läkemedlet framgångsrikt klarar av neutraliseringen av bakterieceller, kommer det efter sådan behandling att finnas ett område som saknar kolonier. Om reaktionen på antibiotikan är negativ kommer bakterierna att överleva.
Om du använder ett flytande näringsmedium, förbered först flera provrör med en bakteriekultur av olika utspädningar. Antibiotika läggs till dessa provrör, och processen för interaktion mellan ämnet och mikroorganismer observeras under dagen. Som ett resultat erhålls ett högkvalitativt antibiogram, enligt vilket det är möjligt attbedöm läkemedlets effektivitet för en viss gröda.
Huvuduppgifter för analys
Här listar målen och stadierna för den bakteriologiska forskningsmetoden.
1. Skaffa utgångsmaterialet som kommer att användas för att isolera bakteriekolonier. Det kan vara ett utstryk från ytan av något föremål, slemhinnor eller hålrum i ett mänskligt organ, ett blodprov.
2. Odling av kultur på ett fast näringsmedium. Efter 24-48 timmar kan kolonier av olika typer av bakterier hittas på petriskålen. Vi väljer den önskade enligt morfologiska och/eller biokemiska kriterier och arbetar vidare med den.
3. Förökning av den resulterande kulturen. Den bakteriologiska forskningsmetoden kan baseras på en mekanisk eller biologisk metod för att öka antalet bakteriekulturer. I det första fallet arbetar man med fasta eller flytande näringsmedier, på vilka bakterier förökar sig i en termostat och bildar nya kolonier. Den biologiska metoden kräver naturliga förutsättningar för att öka antalet bakterier, så här blir försöksdjuret infekterat med mikroorganismer. Efter några dagar kan många prokaryoter hittas i ett blodprov eller utstryk.
4. Arbeta med renodlad kultur. För att bestämma den systematiska positionen för bakterier, såväl som deras tillhörighet till patogener, är det nödvändigt att utföra en grundlig analys av celler enligt morfologiska och biokemiska egenskaper. När man studerar patogena grupper av mikroorganismer är det viktigt att vetahur effektiva är antibiotika.
Detta var en allmän egenskap hos den bakteriologiska forskningsmetoden.
Funktioner i analysen
Huvudregeln för bakteriologisk forskning är maximal sterilitet. Om du arbetar med provrör, bör kulturer och subkulturer av bakterier endast utföras över en uppvärmd spritlampa.
Alla stadier av den bakteriologiska forskningsmetoden kräver användning av en speciell slinga eller en pasteurpipett. Båda verktygen måste förbehandlas i lågan från en alkohollampa. När det gäller Pasteurpipetten, här, innan termisk sterilisering, är det nödvändigt att bryta av pipettens spets med en pincett.
Tekniken att så bakterier har också sina egna egenskaper. Först, vid inokulering på fasta medier, förs en bakterieslinga över agarens yta. Slingan ska naturligtvis redan ha ett prov av mikroorganismer på ytan. Inokulering i odlingsmediet praktiseras också, i vilket fall öglan eller pipetten bör nå botten av petriskålen.
När man arbetar med flytande media används provrör. Här är det viktigt att se till att vätskor inte vidrör kanterna på laboratorieglas eller -proppar, och att de instrument som används (pipett, ögla) inte vidrör främmande föremål och ytor.
Vikten av den biologiska forskningsmetoden
Bakterieprovsanalys har sina praktiska tillämpningar. Primärtbakteriologisk forskningsmetod kan användas inom medicin. Till exempel är det nödvändigt att studera patientens mikroflora för att fastställa den korrekta diagnosen, samt för att utveckla rätt behandlingsförlopp. Ett antibiogram hjälper här, som visar aktiviteten hos läkemedel mot patogenen.
Analys av bakterier används i laboratoriet för att upptäcka farliga sjukdomar som tuberkulos, återfallande feber eller gonorré. Det används också för att studera bakteriesammansättningen av tonsillerna, organhålorna.
Bakteriologisk forskningsmetod kan användas för att fastställa föroreningen av miljön. Enligt data om den kvantitativa och kvalitativa sammansättningen av ett utstryk från ytan av ett föremål, bestäms graden av population av denna miljö av mikroorganismer.
