Nyligen har en pålitlig, mycket känslig och snabb metod för att diagnostisera olika mänskliga infektionssjukdomar utvecklats. Denna metod kallas "PCR-analys". Vad är det, vad är dess väsen, vilka mikroorganismer kan det avslöja och hur man tar det korrekt, kommer vi att berätta i vår artikel.
Upptäcktshistorik
Uppfann polymeraskedjereaktionsmetoden (PCR) av den amerikanske vetenskapsmannen Kary Mullis 1983. Till en början patenterades diagnosmetoden av Cetus Corporation, där dess skapare arbetade. Men 1992 såldes alla rättigheter och patent till Hoffman-La Roche. Efter det visade det sig att liknande studier genomfördes parallellt och registrerades av andra amerikanska biologer, som Alice Chen, David Edgar, John Trell. 1980 tog de sovjetiska forskarna A. Slyusarenko, A. Kaledin och S. Gorodetsky också hand om detta problem. Därför var det omöjligt att fastställa den enda upphovsrättsinnehavaren. Många framstående biokemister har gjort ett visst bidrag till utvecklingen av polymeraskedjereaktionstekniken och har patenterat sina innovationer. För närvarande analysenPCR utförs överallt i specialutrustade laboratorier.
Kärnan i PCR-diagnostikmetoden
PCR-analys: vad är det och hur fungerar det? Kärnan i metoden är att öka volymen av en viss mikrobiell miljö under artificiella förhållanden med hjälp av ett speciellt DNA-polymerasenzym. För detta multipliceras det befintliga DNA-materialet många gånger. Således, i närvaro av en patogen mikroorganism i provet, kommer dess mängd att öka på grund av biokemiska laboratoriemanipulationer, och det kommer inte att vara svårt att upptäcka bakterien under ett mikroskop.
Hur går materialforskning till?
Krävs för analys:
- DNA-matris;
- primers som förbinder ändarna på ett stycke material;
- värmebeständigt DNA-polymerasenzym;
- kemikalier som får enzymer att fungera korrekt;
- buffertlösning som krävs för att skapa lämpliga förutsättningar för tillväxt och utveckling av DNA-material.
För att utföra PCR utförs 25-30 repetitioner, bestående av tre steg: denaturering, hybridisering och förlängning.
För analysen av polymerkedjereaktionen används en speciell anordning - en förstärkare. Modern utrustning låter dig ställa in det nödvändiga programmet för värme- och kylrör för att eliminera fel under diagnostik.
Var används diagnostik?
Polymerkedjereaktionsmetoden används inom olika medicinområden:
- kriminalister medden identifierar genetiskt material som hår, saliv eller blod;
- PCR-blodprov hjälper till med genotypning, till exempel för att upptäcka en individuell genetiskt inneboende reaktion på ett visst läkemedel;
- använder den här metoden för att fastställa närvaron av familjeband mellan människor;
- Den mest populära PCR-metoden har blivit inom medicinsk diagnostik för att fastställa olika infektionssjukdomar.
Vilka infektioner upptäcker PCR?
Så, medicin har länge och framgångsrikt använt PCR-analys. Vad det är vet vi redan. Och vilka patogener kan upptäckas med det? Följande infektionssjukdomar diagnostiseras med PCR-metoden:
- hepatit A, B, C;
- ureaplasmosis;
- candidiasis;
- chlamydia;
- mykoplasmos;
- gardnerellose;
- infektiös mononukleos;
- trichomoniasis;
- papillomvirusinfektion;
- tuberkulos;
- herpesinfektion typ 1 och 2;
- helicobacteriosis;
- cytomegalovirus;
- difteri;
- salmonellos;
- HIV-infektion.
PCR-metoder används också vid diagnos av cancer.
Metodfördelar
PCR-diagnostik har flera fördelar:
- Hög känslighet. Även i närvaro av endast ett fåtal molekyler av mikroorganism-DNA, bestämmer PCR-analys förekomsten av infektion. Metoden hjälper till med kroniska och latent förekommande sjukdomar. Ofta i sådana fall, mikroorganismenär annars oodlingsbar.
- Vilket material som helst är lämpligt för forskning, som saliv, blod, könssekret, hår, epitelceller. Det vanligaste är analys av blod och urogenit alt utstryk för PCR.
- Ingen långtidsskörd krävs. Den automatiska diagnostiska processen låter dig få resultaten av studien efter 4-5 timmar.
- Metoden är nästan 100 % tillförlitlig. Endast enstaka fall av falskt negativa resultat har registrerats.
- Förmågan att identifiera flera typer av patogener från ett enda materialprov. Detta påskyndar inte bara processen för att diagnostisera sjukdomen, utan minskar också väsentligt materialkostnaderna. Ofta ordinerar läkaren en omfattande PCR-analys. Priset för undersökningen, som består av bestämning av sex patogener, är cirka 1 500 rubel.
Rekommendationer för att förbereda analys
För att resultaten ska vara tillförlitliga under PCR-studien måste du göra testet, enligt rekommendationerna för preliminär förberedelse för diagnos:
- Innan du donerar saliv bör du avstå från att äta och ta medicin 4 timmar före provtagning. Omedelbart före proceduren, skölj munnen med kokt vatten.
- Ovanstående regler bör också följas när du tar ett prov från insidan av kinden. Efter sköljning rekommenderas det att utföra en lätt hudmassage för att framhäva utsöndringen av körteln.
- Urin samlas vanligtvis upp hemma. För att göra detta måste du genomföra en grundlig toalettgenitalier. Samla upp 50-60 ml urin i en steril plastbehållare. För att säkerställa materialets renhet rekommenderas det för kvinnor att föra in en tampong i slidan och för män att dra tillbaka hudvecket så mycket som möjligt. Donera inte under mens.
- För att donera spermier måste du avstå från samlag i 3 dagar innan provtagning. Läkare avråder också från att besöka bastun och ta ett varmt bad, dricka alkohol och kryddig mat. Du måste avstå från att kissa 3 timmar före testet.
- För att ta ett urogenit alt utstryk, till exempel, om ett PCR-test görs för klamydia, rekommenderas både kvinnor och män att ha sexuell vila i 3 dagar. Antibakteriella läkemedel bör inte tas 2 veckor före analysen. I en vecka måste du sluta använda intima geler, salvor, vaginal suppositorier, douching. 3 timmar innan undersökningen ska du avstå från att kissa. Under menstruation görs inte provtagning, endast 3 dagar efter upphörande av blodutsläpp kan du ta ett urogenit alt utstryk.
PCR under graviditet
Under den period då barnet väntar är många sexuellt överförbara infektioner extremt farliga för fostrets normala utveckling. STD kan framkalla intrauterin tillväxthämning, missfall eller för tidig födsel, medfödda missbildningar hos barnet. Därför är det oerhört viktigt att genomgå en PCR-undersökning i tidig graviditet. Det är nödvändigt att klara analysen vid registrering - upp till 12 veckor.
Materialet tas från livmoderhalskanalen med en speciell borste. Förfarandet är smärtfritt och utgör ingen fara för barnet. Vanligtvis under graviditeten utförs en analys för klamydia med PCR-metoden, såväl som för ureaplasmos, mykoplasmos, cytomegalovirus, herpes, papillomvirus. Ett sådant komplex av undersökningar kallas PCR-6.
PCR för HIV-diagnos
På grund av att polymeraskedjereaktionsmetoden är mycket känslig för förändringar i kroppen och förutsättningarna för diagnosen kan många faktorer påverka resultatet. Därför är PCR-analys för HIV-infektion inte en tillförlitlig metod, dess effektivitet är 96–98 %. I de återstående 2-4 % av fallen ger testet falskt positiva resultat.
Men i vissa situationer är HIV PCR-diagnostik oumbärlig. Det ges vanligtvis till personer med ett falskt negativt ELISA-resultat. Sådana indikatorer indikerar att en person ännu inte har utvecklat antikroppar mot viruset och att de inte kan upptäckas utan en multipel ökning av antalet. Detta är precis vad som kan uppnås genom att utföra ett PCR-blodprov.
Denna diagnostik är också nödvändig för barn under det första levnadsåret som är födda av en HIV-positiv mamma. Metoden är det enda sättet att på ett tillförlitligt sätt fastställa ett barns status.
PCR för diagnos av hepatit
Med polymeraskedjereaktionsmetoden kan DNA från hepatit A, B, C-virus detekteras långt innan antikroppar bildas mot infektionen eller debuten av sjukdomssymtom. PCR-analys för hepatit C är särskilt effektiv, eftersom denna sjukdom i 85% av fallen är asymtomatisk och utansnabb behandling går in i det kroniska stadiet.
Stidig upptäckt av patogenen hjälper till att undvika komplikationer och långtidsbehandling.
Omfattande PCR-undersökning
Komplex PCR-analys: vad är det? Detta är en undersökning med den polymera kedjereaktionsmetoden, som inkluderar bestämning av flera typer av infektioner samtidigt: mycoplasma genitalium, mycoplasma hominis, gardnerella vaginalis, candida, trichomonas, cytomegalovirus, ureaplasma urealiticum, herpes typ 1 och 2, gonorré, papillomavirus. Priset för sådan diagnostik varierar från 2000 till 3500 rubel. beroende på klinik, material och utrustning som används, samt på typen av analys: kvalitativ eller kvantitativ. Vad som är nödvändigt i ditt fall - läkaren avgör. I vissa fall räcker det bara att bestämma förekomsten av patogenen, i andra, till exempel med HIV-infektion, spelar en kvantitativ titer en viktig roll. Vid diagnos av alla ovanstående patogener kallas undersökningen "PCR-12-analys".
Transkription av analysresultat
Det är inte svårt att dechiffrera PCR-analysen. Det finns bara 2 skalor av indikatorn - "positivt resultat" och "negativt resultat". När en patogen upptäcks kan läkare bekräfta förekomsten av sjukdomen med 99% säkerhet och börja behandla patienten. Med en kvantitativ metod för att bestämma infektion kommer motsvarande kolumn att indikera den numeriska indikatorn för upptäckta bakterier. Endast en läkare kan fastställa omfattningen av sjukdomen och ordinera nödvändig behandling.
I vissa fall, till exempel, vid fastställande av HIV-infektion med PCR, med ett negativt resultat, blir det nödvändigt att utföra ytterligare undersökningar för att bekräfta de erhållna indikatorerna.
Var ska man testa sig?
Var gör man ett PCR-test: på en offentlig klinik eller i ett privat laboratorium? Tyvärr, i kommunala medicinska institutioner, är utrustningen och metoderna ofta föråldrade. Därför är det bättre att ge företräde åt privata laboratorier med modern utrustning och högt kvalificerad personal. På en privat klinik kommer du dessutom att få resultat mycket snabbare.
I Moskva erbjuder många privata laboratorier PCR-analys för olika infektioner. Till exempel, på sådana kliniker som Vita, Complex Clinic, Happy Family, Uro-Pro, utförs PCR-analys. Priset för undersökningen är från 200 rubel. för att identifiera en patogen.
Det kan dras slutsatsen att diagnos av infektionssjukdomar genom PCR i de flesta fall är ett snabbt och tillförlitligt sätt att upptäcka patogenen i kroppen i de tidiga stadierna av infektion. Men ändå, i vissa fall, är det värt att välja andra diagnostiska metoder. Endast en specialist kan avgöra behovet av en sådan studie. Att dechiffrera PCR-analysen kräver också ett professionellt tillvägagångssätt. Följ din läkares råd och ta inte tester du inte behöver.
