Kolorimetrisk metod - en analys baserad på en jämförelse av färgmättnaden för de undersökta och kända ämnena. Resultaten av fysikaliska och kemiska tester är av stort värde för många vetenskapsgrenar, men mest av allt används forskningen inom medicin.
Käran i den kolorimetriska metoden
Det finns många typer av tester som bestämmer den kemiska sammansättningen av ämnen. Vissa av dem är universella och används ofta inom olika områden, andra är specifika, med högre noggrannhet. Den kolorimetriska metoden är universell.
Kärnan i analysen ligger i det faktum att färgmättnaden för en lösning med en okänd koncentration jämförs med färgen på en standardlösning. Under analysen, som ett resultat av interaktionen av den undersökta komponenten med ett visst reagens, bildas en färgad förening. Efter avslutad reaktion jämförs den resulterande nyansen med färgen på lösningarna, vars koncentration redan är känd.
Man tror att grundaren av kolorimetri är Robert Boyle. Han använde squeezetanniner för att skilja järn från koppar i lösning. Det var Boyle som märkte att ju högre koncentrationen av järn i lösningen var, desto rikare var tonen i den senare.
Colorimetry
Colorimetri är en metod för att bestämma mängden av ett ämne i lösningar. Analysen är baserad på Bouguer-Lambert-Beers lag: när en ljusstråle träffar ett tätt absorberande skikt av ett ämne försvagas dess intensitet.
Den kolorimetriska metoden för att bestämma koncentrationen av ett ämne kan använda en visuell jämförelse eller jämförelse med speciella instrument för att mäta färgintensitet. Jämförelsen görs på ett direkt och kompenserande sätt.
- Rak. Metoden går ut på att jämföra färgnivån på testlösningen vid en viss densitet och temperatur på vätskan med en referenslösning. Vid användning av fotokolorimetrar och spektrofotometrar används destillerat vatten som referenslösning. Enheterna mäter strömstyrkan, vilket beror på ljusets intensitet.
- Kompenserande. Metoden bygger på att färgen på det studerade provet bringas till referensen. Resultatet uppnås genom att tillsätta ett lösningsmedel eller öka höjden på lagret av det färgade mediet.
Användningen av en spektrofotometer, monokromator och andra precisionsinstrument förenklar den redan enkla forskningsmetoden ytterligare och gör att du kan öka noggrannheten i resultaten. Dessa enheter kan mäta mängden ljustransmission och bestämma våglängden.
Där analys tillämpas
Colorimetrisk analysmetod används när den exakta kemiska sammansättningen är känd, det finns ett referensprov för jämförelse och temperaturen på testet och referensprovet är densamma. Om du snabbt behöver bestämma mängden av ett färgat ämne, men det är så litet att det är omöjligt att tillämpa analysmetoden.
Colorimetri används ofta inom medicin för klinisk biokemisk forskning och andra områden:
- läkemedelsindustrin;
- mat- och alkoholindustrin;
- agronomy (bestämning av jordkvalitet).
För- och nackdelar
Den kolorimetriska metoden har, precis som alla andra, för- och nackdelar.
Fördelarna inkluderar följande:
- lätt att analysera, minsta möjliga förberedande procedurer;
- möjlighet att testa även med en liten mängd testmaterial;
- det finns inget behov av dyr utrustning, även om moderna enheter som inte är billiga har använts alltmer på sistone. Men de ger det mest exakta resultatet.
Nackdelar: låg analysnoggrannhet jämfört med analytiska metoder.
Biuretmetod för proteinbestämning
Protein i blodserum är en indikator som återspeglar tillståndet för homeostas. En ökning av koncentrationen av en makromolekylär förening i blodet kallas hyperproteinemi, en låg h alt kallas hypoproteinemi.
Proteiner iblodserum har en annan sammansättning, struktur, egenskaper, utför olika funktioner. De är uppdelade i enzymer, hormoner, immunglobuliner och andra. Alla grupper av proteiner har ett antal gemensamma egenskaper, utifrån vilka metoder har utvecklats för bestämning av makromolekylära organiska föreningar i biologiska vätskor.
Av alla metoder inom klinisk biokemi används oftast kolorimetriska metoder för att bestämma protein. De är relativt billiga, vilket är viktigt för budgetorganisationer. och är ganska enkla. Den vanligaste är biuretmetoden. Kärnan i metoden: proteiner i en alkalisk miljö reagerar med kopparsulfat och bildar lila föreningar. Proteinh alten i blodet bestäms av färgningens mättnad. Biomaterial för analys tas på morgonen på fastande mage.
Analysen är mycket exakt, men det finns faktorer som påverkar koncentrationen av protein i blodet:
- fysisk aktivitet strax före biomaterialprovtagning;
- sista veckorna av graviditet och amning;
- användningen av läkemedlen Corticotropin, Miscleron, Clofibrate ökar proteinh alten i blodet, och användningen av Pyrazinamid och östrogen - för att minska koncentrationen;
- fel handposition under biomaterialprovtagning.
Bestämning av järn
Mängden järn i blodet är en av huvudindikatorerna vid diagnos av olika sjukdomar. Ämnet är koncentrerat i hemoglobin, vilket säkerställer transporten av syre till vävnaderna. Förbestämning av järn med kolorimetrisk metod, oftast används en lösning av batofenantrolin (0,02%) som huvudreagens. Biomaterial - serum utan spår av hemolys.
Käran i metoden: interaktionen mellan järnjoner och sulfaterad bathofenantrolin bildar ett färgat komplex, vars mättnad bestäms fotometriskt. För att få en klar lösning är det nödvändigt att följa reglerna för provtagning av biomaterialet, men för att noggrant bestämma de optiska tätheterna av järn-ligandkomplex frigörs järn från hemoglobin med hjälp av hydroxylamin och rengöringsmedel (natriumdodecylsulfat). Testresultatet bestämmer förekomsten och graden av patologi. Normal järnkoncentration bör vara:
- 14, 2 – 26,0 µmol/L (män);
- 10, 6-21, 7 µmol/L (kvinnor).
Järnbrist är vanligtvis förknippat med blodförlust, otillräckligt intag av kosten eller dålig absorption från mag-tarmkanalen.
kolesteroltest
Kolesterol är ett organiskt ämne som finns i cellväggen hos många organismer, inklusive människor. Det är nödvändigt för produktionen av kolekalciferol och steroidhormoner. En kolesterolnivå på 3,37-5,2 mmol/L anses vara normal. Förhöjt innehåll är en av huvudorsakerna till ateroskleros.
Colorimetriska metoder för att bestämma kolesterol gör att du kan känna igen kärlsjukdomar i ett tidigt skede. Enligt patoanatomiska resultat i dödligt utfall av ischemi, koncentrationen av lipofil alkohol hos patientervar 6,5-7,8 mmol/L.
Principen för den kolorimetriska metoden är att kolesterol oxideras av 3beta-hydroxi-steroid oxidoreduktas, vilket frigör väteperoxid, som omvandlar p-aminoatipyrin till en färgad förening. H alten av kolesterol bestäms av mättnaden av dess färg.
När man gör ett test på ett barn måste man ta hänsyn till att koncentrationen av kolesterol i barndomen inte bör överstiga 4,1 mmol/l.
Vad är den enzymatiska kolorimetriska metoden?
Enzymatiska tester är baserade på användning av reaktioner av enzymer med hög aktivitet. De används i stor utsträckning inom analytisk kemi för att bestämma olika ämnen - från nitratjoner till makromolekyler.
Enzymatiska (enzymatiska) metoder är specifika, vilket möjliggör analys av vissa ämnen i närvaro av andra ämnen med liknande sammansättning. De vanligaste metoderna baserade på användningen av enzymet - glukosoxidas. Testet används för att bestämma koncentrationen av glukos i blodet. Testets noggrannhet gör att det kan användas för att justera dosen av hypoglykemiska medel hos patienter med typ 2-diabetes.
Glukosoxidantmetoden anses vara en av de bästa kvantitativa metoderna för att bestämma glukos. Både blod (kapillär) och serum kan användas som biomaterial, men plasma är mer att föredra eftersom det har en lägre hematokrith alt, vilket negativt påverkar noggrannheten i resultatet.
Den kinetiska metoden för fotometri används huvudsakligen. Dess väsen ligger i det faktum attdet fastställda förhållandet mellan glukosoxidas och peroxidas, under en viss tid efter reaktionens start kommer bildningshastigheten för en färgad förening att stå i proportion till nivån av glukos i provet. Den största fördelen med testet är att resultatet inte påverkas av förekomsten av tredjepartsföreningar i provet. Metoden har också en nackdel - dyra mätinstrument från tyska eller svenska tillverkare krävs för testet.
Slutsats
Den kolorimetriska metoden är exakt och lätt att använda. Dess användning inom medicin möjliggör tidig upptäckt av olika patologiska förändringar i kroppen. Med introduktionen av ny teknik förbättras metoden och blir mer och mer populär.
